Подсчет лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева

Что такое камера Горяева, ее технические характеристики

Камера Горяева

Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.

Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.

Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.

Описание сетки камеры Горяева

Сетка в камере Горяева

Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм³ или 10^-4 мл.

Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.

Правило Егорова для подсчета форменных элементов

Правильный подсчет клеток в сетке

Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.

Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.

Методика подсчета лейкоцитов

При ошибке анализатора помогает камера Горяева

Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.

Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой

Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.

После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.

После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.

Методика подсчета эритроцитов

Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток

Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.